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3分鐘了解下cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作說明

更新時(shí)間:2023-01-14   點(diǎn)擊次數(shù):951次
  cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng),如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸光度即可。
 
  cck8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作說明:
 
  1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔),通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔約2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔約5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。
 
  2、按照實(shí)驗(yàn)需要,進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10μL特定的藥物刺激,并孵育一段時(shí)間(例如:6、12、24或48小時(shí))。
 
  3、向每孔加入10μLCCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL,則需加入20μLCCK-8溶液,以此類推。
 
  4、在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí),具體時(shí)間可以通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。
 
  5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光值,若無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片,但是450nm檢測(cè)靈敏度最高。如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,可以使用大于600nm的波長(zhǎng),例如650nm,作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
 
  6、如果需要暫時(shí)不測(cè)定O.D值,可以向每孔中加入10μL0.1MHCl溶液或者1%w/v的SDS溶液,避光保存在室溫,24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

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